VB ЦГЛ им. И. В. Мичурина извлечение и посев зародышей на питательные среды проводят в разные сроки: через 40, 60, 80 и т. д. днейпосле опыления. Эти сроки примерные и могут изменяться в зависимости от объектов и сроков созревания плодов.
Исследования сопровождаются изучением лабораторными методами прорастания пыльцы перед опылением, а также и после опыления на рыльцах пестиков (методом А. С. Татаринцева). Проводится изучение особенностей формирования зародышей.
Часть образующихся завязей и плодов с семенами используют для искусственной культуры зародышей в отмеченные выше сроки. Другая часть служит контролем для определения процента образующихся при гибридизации плодов и семян и всхожести последних.
Перед съемом плодов необходимо подготовиться к посеву. Для посева зародышей сливы на питательную среду используют пробирки, достаточно широкие, диаметром около 22 мм.
В литературе описаны различные питательные среды. Мы используем методику, которую в течение ряда лет применяет для искусственного выращивания зародышей из недозрелых плодов ранних сортов черешни и персика А. И. Здруйковская-Рихтер в Никитском ботаническом саду. Она использует в качестве искусственной среды среду Уайта состава (на 1 л раствора): агар — 7,5 г, сахароза — 20 г, гликокол — 3 мг, витамин Bi — 0,1 мг, никотиновая кислота — 0,5 мг, витамин Вб—0,1 мг, Са(ГЧОз)2-200 мг, MgSO4-360 мг, KNO3-80 мг, KG1 — 65 мг, NaoSO4-200 мг, NaH2P04-16,5 мг, KJ —0,75 мг, Fe2(S04)3—2,5 мг, MnS04-4,5Mr, ZnS04—1,5 мг, Н3В03— 1,5 мг. (Среда приведена но книге Уайта «Культура растительных тканей», М., 1949.)
Свежеприготовленную питательную смесь наливают в пробирки, которые сразу же закрывают специально изготовленными и подобранными заранее пробками из ваты и марли, применяющимися в микробиологической технике. После разлива пробирки помещают в автоклав для стерилизации. Затем их ставят в штативы, и после охлаждения они готовы к посеву зародышей.
Снятые плоды (речь идет о достаточно развитых плодах) промывают в воде и извлекают из них косточки.
При посеве зародышей необходимо строго соблюдать чистоту и стерильность. Это относится как к помещению для работы, так и к искусственной питательной среде, опытным зародышам, одежде сотрудников (халаты и др.) и оборудованию.
Посев -лучше проводить в специальных лабораториях, в крайнем случае — в приспособленных комнатах, которые обрабатывают в соответствии с современными требованиями стерилизации Помещений. Извлекать и высевать зародыши желательно на чистом столе, лучше, если тот покрыт протертой спиртом достаточно толстой полиэтиленовой пленкой. На стол помещают штатив с пробирками, кристаллизатор с семенами, маленькие тисочки для разрушения и удаления косточки, спиртовку, стакан со спиртом, пинцеты, скальпели, специальные стеклянные шпатели. Само собой разумеется, что оборудование должно быть простерилизовано.
Косточку берут пинцетом, погружают в спирт и быстро обжигают с тем, чтобы не поднять высоко температуру зародыша. Затем ее раскалывают, извлекают зародыш, который освобождают от оболочки и помещают на скальпель, зародыш можно взять также с помощью длинного пинцета. Руками к зародышу прикасаться не следует. Руки перед работой должны быть тщательно вымыты водой с мылом, в процессе работы их дезинфицируют хотя бы протиранием тампоном, смоченным в спирте. Пробирку со средой помещают горлышком над пламенем спиртовки наклонно, так, чтобы горлышко пробирки и ватная пробка находились в зоне температуры, убивающей микроорганизмы и их споры. Затем в пробирку помещают зародыш и над пламенем спиртовки ее затыкают пробкой.
Источник: http://lacihgaleclub.ru/plodi/437-izvlechenie-i-posev-zarodyshej-na-pitatelnye-sredy.html |